• 266500 青岛大学附属医院眼科(胡迭,现在青岛眼科医院;周贤慧,现在烟台业达医院眼科;曹博雯,现就学于德国图宾根大学);
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目的观察Delta样配体4(Dll-4)对早期糖尿病(DM)大鼠视网膜病理结构的影响及其与血管内皮生长因子受体(VEGFR)-2的关系。方法雄性Sprague-Dawley大鼠70只,随机数字表法分为正常组(10只)和DM组(60只)。DM组大鼠经腹腔注射链脲佐菌素诱导DM模型;剔除血糖恢复和死亡大鼠,最终50只大鼠纳入统计。正常组大鼠注射等体积柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。随机数字表法将DM组大鼠分为DM 1m组、DM 2m组、DM 3m组、DM 3m+Anti组、DM 3m+磷酸盐缓液(PBS)组,各组均为10只大鼠。DM 3m+Anti组大鼠玻璃体腔注射抗Dll-4多克隆抗体4 μl,抗体浓度0.25 mg/ml;DM 3m+PBS组大鼠玻璃体腔注射等体积PBS。注射后5 d,处死大鼠。其余各组大鼠不做任何处理,分别于成模后1、2、3个月处死。苏木精-伊红染色观察视网膜各层结构及微血管变化,测量视网膜总厚度;免疫组织化学和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测视网膜中Dll-4、VEGFR-2 mRNA的表达。单因素方差分析比较各组大鼠视网膜中Dll-4、VEGFR-2表达差异;两组间比较采用最小显著差法t检验。结果光学显微镜观察发现,DM 3m组大鼠视网膜神经节细胞层明显水肿,内、外核层变薄,细胞数量减少,排列紊乱,外丛状层(OPL)水肿明显,微血管异常扩张;DM 3m+Anti组大鼠视网膜OPL水肿较DM 3m组减轻,其余各层无明显差异。与正常组比较,DM 3m组、DM 3m+Anti组、DM 3m+PBS组大鼠视网膜总厚度增加,差异均有统计学意义(t=5.596、3.290、4.286,P=0.000、0.008、0.002)。免疫组织化学染色结果显示,正常组大鼠视网膜神经节细胞层可见少量Dll-4阳性表达;神经节细胞层及内、外核层均可见少量VEGFR-2阳性表达。DM 1m组、DM 2m组、DM 3m组大鼠视网膜血管内皮细胞中Dll-4阳性表达逐渐增加。DM 3m+Anti组大鼠视网膜各层及血管内皮细胞中Dll-4阳性表达明显减少,而VEGFR-2表达显著增加。DM 3m+PBS组大鼠视网膜Dll-4、VEGFR-2阳性表达与DM 3m组无明显差异。荧光定量PCR检测结果显示,DM 3m组大鼠视网膜中Dll-4、VEGFR-2 mRNA表达量较正常组明显升高,差异有统计学意义(t=6.705、20.871,P<0.05)。与DM 3m组比较,DM 3m+Anti组大鼠视网膜Dll-4 mRNA表达量降低,VEGFR-2 mRNA表达量升高,差异均有统计学意义(t=2.681、3.639,P<0.05)。DM 3m+PBS组、DM 3m组大鼠视网膜中Dll-4、VEGFR-2 mRNA表达量比较,差异无统计学意义(t=0.513、0.657,P>0.05)。结论DM大鼠早期视网膜病变过程中视网膜血管内皮细胞中Dll-4表达逐渐增加;抑制Dll-4表达,VEGFR-2的表达上调,且OPL水肿减轻。

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