• 天津医科大学眼科医院、眼视光学院、眼科研究所 天津市视网膜功能与疾病重点实验室300384;
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目的 观察丁基苯酞(NBP)对H2O2诱导下RPE细胞凋亡的保护作用。方法 以人ARPE-19细胞系为实验细胞,并将其分为对照组、模型组及NBP组。对照组单纯采用完全培养基培养细胞。模型组采用200 μmol/L的H2O2刺激细胞2 h,换液后给予完全培养基培养细胞。NBP组采用200 μmol/L的H2O2及1 μmol/L的NBP共同培养细胞2 h,换液后给予完全培养基联合1 μmol/L的NBP继续培养细胞。采用MTT法检测细胞受到氧化应激刺激后的细胞活力;HE染色对RPE细胞形态进行观察;Hoechst33258染色观察RPE细胞凋亡形态;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)观察细胞膜电位改变及细胞早期凋亡变化;2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色观察细胞内ROS生成堆积情况;细胞免疫荧光和Western blot分析NBP对血红素氧合酶1(HO-1)表达的影响。结果 MTT法检测结果显示,细胞培养24、48 h,对照组(t=17.710、13.760,P<0.000 1、<0.000 1)、NBP组(t=4.857、9.225,P=0.000 7、P<0.000 1)细胞生存力均较模型组更强,差异均有统计学意义。HE染色及Hoechst33258染色观察发现,与对照组比较,模型组细胞数量明显变少,细胞形态不完整;与模型组比较,NBP组细胞数量明显增多,细胞形态更好。JC-1法检测结果显示,模型组凋亡细胞数较对照组明显增多,NBP组凋亡细胞数较模型组明显减少。DCFH-DA染色观察发现,模型组细胞内ROS堆积较对照组更多,NBP组细胞内ROS堆积较模型组更少。免疫染色观察发现,NBP组细胞的HO-1荧光强度较对照组明显增高,差异有统计学意义(t=10.270,P=0.000 5)。Western blot检测结果显示,NBP以时间依赖性的方式上调HO-1的表达水平;NBP作用4、8、12 h时HO-1相对表达量较0 h时呈明确升高趋势,差异有统计学意义(F=164.91,P<0.05)。结论 氧化应激损伤可下调RPE细胞的生存力并诱导其出现凋亡,NBP通过上调HO-1的表达,有效提高RPE细胞抗氧化能力,减轻细胞损伤并抑制细胞凋亡。

引用本文: 邢小丽, 黄亮瑜, 张哲, 黄欣远, 王琼, 李筱荣, 东莉洁. 丁基苯酞对H2O2诱导下视网膜色素上皮细胞凋亡的保护作用. 中华眼底病杂志, 2019, 35(5): 480-487. doi: 10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2019.05.011 复制

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