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目的  观察 alpha;-硫辛酸对高压条件下培养大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法  将RGC分为正常对照组、阴性对照组、单纯加压组、加压联合不同浓度 alpha;-硫辛酸干预组。正常对照组和单纯加压组不做任何处理;阴性对照组仅接受200  mu;mol/L  alpha;-硫辛酸预处理;加压联合不同浓度的 alpha;硫辛酸干预组分别用50、100、200  mu;mol/L等3种不同浓度的 alpha;-硫辛酸对其进行干预。 alpha;-硫辛酸预处理1 h后,单纯加压组和各干预组置于50 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)下培养24 h;正常对照组、阴性对照组置于常压下培养24 h。分别用噻唑蓝比色法检测各组细胞的活性;4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察各组细胞核形态改变;实时聚合酶链反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测并比较各组细胞中锰超氧化物歧化酶(MnSOD) mRNA和蛋白表达水平的变化。结果  单纯加压组细胞活性为(65.6 plusmn;3.4)%,50、100、200  mu;mol/L 3种浓度的 alpha;-硫辛酸干预组细胞活性分别为(75.1 plusmn;3.3)%、(81.8 plusmn;2.9)%、(87.9 plusmn;3.1)%,均较单纯加压组显著增高(t=5.108、10.007、12.513,P<0.05)。DAPI染色显示,加压后RGC-5细胞核可见空泡、染色质高度凝聚、边缘化等典型的凋亡特征,而 alpha;-硫辛酸干预组仅有部分细胞核染色质表现出浓缩现象。Real-time PCR及Western blot检测结果显示,加压培养后细胞内MnSOD mRNA和蛋白相对表达量较正常对照组显著降低(t=22.045、26.979,P<0.01);与单纯加压组相比, alpha;-硫辛酸干预组细胞内MnSOD mRNA和蛋白相对表达量均显著增高,差异有统计学意义(t=9.171、12.267、23.567、7.723、12.009、28.198,P<0.05);不同浓度的 alpha;-硫辛酸干预组之间,随 alpha;-硫辛酸浓度增加,MnSOD mRNA和蛋白相对表达量呈升高趋势,且差异有统计学意义(F=134.273、194.597,P<0.01)。结论  应用 alpha;-硫辛酸可以显著提高高压条件下大鼠RGC的细胞活性及细胞内MnSOD的表达水平,增强细胞抗氧化损伤能力。

引用本文: 刘兵,郭大东,毕宏生,郭媛媛,陈宁虹,马晓华. α-硫辛酸对高压条件下培养大鼠视网膜神经节细胞的保护作用. 中华眼底病杂志, 2012, 28(5): 501-506. doi: 复制