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找到 关键词 包含"大鼠" 440条结果
  • 抑制肌动蛋白聚合对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞成脂分化的影响研究

    目的探讨细胞骨架重塑对体外大鼠跟腱来源肌腱干细胞(tendon stem cells,TSCs)成脂分化的影响。 方法取3周龄雄性SD大鼠跟腱组织,采用酶消化法分离、培养TSCs,取第3代细胞用于实验。将细胞分别以细胞松弛素D(cytochalasin D,CYD)终浓度为0、50、100、500、1 000 ng/mL的含15%FBS的DMEM培养基进行培养,倒置相差显微镜下观察细胞存活及形态变化,纤维肌动蛋白(fibros actin,F-actin)染色观察细胞骨架,Western blot检测F-actin/球状肌动蛋白(globular actin,G-actin)比值,根据结果选择CYD有效使用浓度进行后续实验。取TSCs分别采用成脂诱导培养基(诱导组)、含CYD的成脂诱导培养基(CYD+诱导组)以及普通培养基(普通组)、含CYD的普通培养基(CYD+普通组)培养3、7 d,收集各组细胞行实时荧光定量PCR检测成脂分化相关特异标志性基因表达,包括过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ, PPARγ)、脂蛋白酯酶(1ipoprotein lipase,LPL)、脂肪酸结合蛋白(aP2),Western blot检测PPARγ、aP2蛋白表达。 结果CYD浓度为100 ng/mL时既能有效干扰TSCs细胞骨架F-actin的聚合,又不影响TSCs的存活,选择该浓度进行后续实验。实时荧光定量PCR及Western blot检测示,3、7 d时CYD+诱导组PPARγ、LPL和aP2基因及PPARγ、aP2蛋白表达均显著高于诱导组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。3、7 d时CYD+普通组PPARγ、LPL和aP2基因表达也显著高于普通组,比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论细胞骨架重塑是TSCs成脂分化的一个先决条件,抑制F-actin聚合可促进TSCs的成脂分化,对肌腱病的发病机制研究具有重要意义。

    发表时间:2016-08-25 10:18 导出 下载 收藏 扫码
  • 大鼠脑出血后细胞凋亡与神经元特异性烯醇化酶及神经损伤关系的研究

    目的:了解大鼠脑出血后血肿周围组织细胞凋亡与神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达及大鼠神经功能缺损程度的关系。方法:用胶原酶注入到大鼠尾状核的方法制作脑出血模型。将大鼠分为脑出血、假手术组、正常组3组。采用苏木素伊红(HE) 染色、NSE免疫组织化学染色及TUNEL分别观察各组在脑出血后第6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d时血肿周围NSE及TUNEL的表达。用Longa评分法评价大鼠神经功能缺损程度。结果:大鼠在胶原酶注入6 h后形成稳定的血肿,在造模24~48 h神经功能缺损程度最重;6 h即见到TUNEL阳性细胞的表达,在48 h最明显;NSE从神经元中漏出弥散到细胞间隙也在48 h达高峰。结论:脑出血血肿周围凋亡与神经功能缺损及NSE的变化有关,凋亡可能在脑出血的神经损伤中起重要的作用。

    发表时间:2016-08-26 02:21 导出 下载 收藏 扫码
  • 大鼠脑出血血肿周围补体与细胞凋亡的动态观察

    摘要:目的:动态观察大鼠脑出血后血肿周围组织补体激活与细胞凋亡的规律。方法:用胶原酶注入到大鼠尾状核的方法制作脑出血模型。将大鼠分为脑出血、假手术组、正常组3组。采用苏木素伊红(HE) 染色、免疫组织化学染色及原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记法(TUNEL)分别观察各组在脑出血后第6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、5 d、7 d时血肿周围补体C3、促凋亡基因(Bax)、抑凋亡基因(Bclxl)及TUNEL的表达。结果补体C3的表达峰值在24~48 h;TUNEL、Bax蛋白表达术后12h增加,48~72 h达高峰,而Bclxl蛋白表达高峰在48h。结论:大鼠脑出血后血肿周围组织补体C3的表达增加与细胞凋亡的演变趋势一致,C3与凋亡有相关。Abstract: Objective: To study the complement activation and apoptosis regular genes changes in the tissues of the perihematoma of intracerebral hemorrhage (ICH) in rats. Methods: Intracerebral hemorrhage was induced in rats by injection of bacterial collagenase into the caudate nucleus. Histopathological changes were studied in 6 h,12 h, 24 h, 2 d, 3 d, 5 d, 7 d after the injection. The immunohistochemistry and TUNEL analysis were performed. The expression of complement factor C3, the TUNELpositive cells, the proapoptotic gene expression (Bax) and the antiapoptotic gene (Bclxl) were examined. Results: The expression of C3 increased to its maximum between 2448 h. The TUNELpositive cells and Bax protein expression increased gradually and reached the peak level between 4872 h. The Bclxl protein reached the peak level at 48 h. The correlation analysis showed that the quantity of C3 was positively related to that of the TUNELpositive cells, but the bax protein was not related to Bclxl protein. Conclusion: The expression of complement factor C3 may contributes to the nerve injury after cerebral hemorrhage and relate to the apotosis in the tissues surrounding the hametoma in rats.

    发表时间:2016-08-26 03:57 导出 下载 收藏 扫码
  • MDL28170对缺氧缺血新生鼠大脑神经细胞凋亡的影响

    摘要:目的:探讨卡配因抑制剂3(MDL28170)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)神经细胞凋亡的影响。方法:建立新生SD大鼠HIBD模型,治疗组于缺养缺血后即刻、2 h、4 h腹腔内注射MDL28170,对照组及手术组同时予生理盐水。缺氧缺血后24 h用免疫组化方法观察大脑皮质及海马CA1区Caspase3 蛋白表达、TUNEL法检测细胞凋亡,观察组织病理改变并计算海马神经元死亡数,透射电镜观察细胞超微结构。结果:缺氧缺血后24 h缺血侧大脑皮质及海马CA1区Caspase3和TUNEL阳性细胞数较对照组明显增加,透射电镜证实有凋亡细胞;MDL28170可减少阳性细胞数量,抑制神经元死亡,差异有显著性(Plt;0.05)。结论:MDL28170可通过抑制神经凋亡而对新生大鼠HIBD具有一定保护作用。Abstract: Objective: To investigate the effect of (Calpain inhibitor3) MDL28170 on neural apoptosis in a neonatal model of hypoxicischemic brain damage (HIBD). Methods: A neonatal model of HIBD was established, 7dayold SD rats were divided into three groups. The treatment group received MDL28170(ip) at 0 h,2 h,4 h after HI, whereas the other two groups were administered normal saline simultaneously. The expression of caspase3 (by immunohistochemistry), neural apoptosis (by TUNEL) in cortex and hippocampus ipsilateral to the insult were observed 24 h after HI; hippocampal CA1 neural loss and electromicroscopic changes were assessed at the same time. Results: Apoptotic body was observed by electromicroscopy. Caspase3 positive cells and apoptotic cells increased significantly in the ipsilateral cortex and hippocampal CA1 region compared to the control, and MDL28170 reduced the number of positive cells, attenuated CA1 neural loss with significance (Plt;0.05). Conclusion: It is suggested that MDL28170 may protect the brain of neonatal rats after HIBD by suppressing neural apoptosis.

    发表时间:2016-08-26 03:57 导出 下载 收藏 扫码
  • 他克莫司撤药诱发大鼠肝移植急性排斥反应的病理学观察与分析

    目的 建立大鼠肝移植急性排斥反应动物模型,观察大鼠肝移植术后他克莫司撤药诱发受体急性排斥反应的肝脏动态病理学变化,为临床肝移植术后他克莫司停药或者用药不规律所致急性排斥反应的预测和评估提供理论依据。方法 通过Kamada二袖套法,建立雄性DA大鼠至Lewis大鼠的原位肝移植模型60例。受体大鼠术前1 d和术后7 d内饲喂治疗剂量的他克莫司,之后半量递减至停药。分别于术后7、14、21及28 d处死部分受体大鼠,获取肝组织标本,观察受体大鼠肝脏大体和镜下的动态病理学改变,并进行排斥活动指数评分,同时观察受体大鼠的术后生存时间。结果 受体大鼠术后7 d内由于受他克莫司的保护,肝脏未出现典型的急性排斥反应表现,至术后14 d由于他克莫司的减量及撤出,迅速发生肝脏的急性排斥反应,术后14、21及28 d排斥活动指数评分分别为(3.7±0.9)分、(6.3±0.9)分和(8.1±0.7)分。受体术后生存时间为(20.85±0.71) d,中位生存期为21 d。结论 通过围手术期短期饲喂治疗剂量他克莫司并逐渐减量至撤药诱发肝移植大鼠急性排斥反应模型术后的急性排斥反应,动态观察该实验条件下排斥反应发生的时限和严重程度,对临床肝移植术后类似情况下所发生的急性排斥反应具有一定的预测价值和严重程度评估价值。

    发表时间:2016-09-08 10:49 导出 下载 收藏 扫码
  • 体外Akt基因转染对骨髓间充质干细胞葡萄糖转运载体-4表达和易位的影响

    目的 探讨葡萄糖转运载体(GLUT)-4是否参与骨髓间充质干细胞(MSCs)的葡萄糖转运以及Akt基因转染提高MSCs耐缺氧能力是否与GLUT-4易位和表达有关。方法 将经Akt基因转染和未转染的MSCs均行常氧(5% CO2)和缺氧(94% N2、1%O2和5%CO2)37 ℃孵育8 h。放射同位素法检测氚标-脱氧葡萄糖(3H-G)的摄取量,免疫细胞化学染色、Western blot和RT-PCR分别检测GLUT-4的蛋白质和mRNA表达。结果 ①缺氧转染组的3H-G摄取量是缺氧非转染组的(1.39±0.13)倍(P<0.05),但仍低于常氧非转染组(P<0.05)。②MSCs在常氧或缺氧、Akt基因转染或无转染的条件下均可表达GLUT-4蛋白。与常氧非转染组比较,缺氧非转染组GLUT-4 mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。③与缺氧非转染组比较,缺氧转染组的GLUT-4 mRNA〔(1.756±0.152)倍〕和蛋白〔细胞总GLUT-4蛋白(1.653±0.312)倍,细胞膜GLUT-4蛋白(2.041±0.258)倍〕的表达水平明显提高(P<0.05),且GLUT-4蛋白易位明显; 但与常氧非转染组比较,其GLUT-4 mRNA和蛋白的表达水平仍较低(P<0.05)。④MSCs的3H-G摄取量与细胞膜中GLUT-4蛋白的表达呈正相关(r=0.415,P=0.001)。结论 GLUT-4可能参与MSCs的葡萄糖转运,Akt基因提高MSCs耐缺氧能力可能与提高GLUT-4的表达和易位有关。

    发表时间:2016-09-08 10:50 导出 下载 收藏 扫码
  • 门静脉海绵样变性大鼠模型制作方法的探讨及体会

    目的 通过门静脉部分缩窄法建立大鼠门静脉海绵样变性(CTPV)动物模型,探索适宜的制模条件并为下一步研究其临床诊断和治疗方法提供可靠、稳定的模型动物。方法 采用Sprague-Dawley(SD)大鼠80只,根据使用的不同直径的钝头针均分为4组: 假手术组、19G组、21G组和23G组,除假手术组外,其余3组分别用19G、21G和23G直径的钝头针行大鼠门静脉部分缩窄术以建立CTPV动物模型。术后6周,同时采用门静脉测压、门静脉造影、门静脉及其周围组织病理学检查评估门静脉高压及海绵样变形成情况。结果 假手术组无大鼠死亡, 19G组、21G组和23G组在制模术后48 h内死亡的大鼠分别为2、4和16只。假手术组和19G组大鼠制模术后6周未形成门静脉高压; 门静脉造影显示门静脉通畅,无曲张与扩张; 病理学检查显示门静脉管腔无增大、内皮细胞光滑、中膜平滑肌层无增厚、外膜完整。21G组和23G组制模术后6周门静脉压力均升高,CTPV形成; 门静脉造影显示门静脉周围侧支循环形成; 病理检查显示多个管腔大小不一、外形不规则血管腔,管腔之间为较狭窄的纤维性间隔,其内可见脂肪细胞、散在的淋巴细胞及肥大细胞,门静脉管腔增大、血管内膜受损、内皮细胞脱落、中膜平滑肌增厚和血栓形成。结论 门静脉部分缩窄法可以复制出类似CTPV 的大鼠模型。21G钝头针更适宜CTPV大鼠模型的制作,该模型动物死亡率低,且成模率较高,比较稳定。

    发表时间:2016-09-08 10:50 导出 下载 收藏 扫码
  • 受体来源未成熟树突状细胞诱导大鼠肝移植免疫低反应性的实验研究

    目的 研究不负载供者抗原的受者未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对大鼠肝移植的保护作用,探讨imDC抑制排斥反应的机理。方法 以SD大鼠作为供体,雄性Wistar大鼠作为受体,随机分为4组,每组10只,建立肝移植急性排斥反应模型,移植前对受体进行不同的处理。 对照组: 受体未接受任何处理; 环孢素A(CsA)组: 术后第2 d开始给予CsA〔10 mg/(kg·d)〕灌胃; 成熟树突状细胞(mDC)组: 受体术前1 d经阴茎背静脉注射受体来源的mDC 1×106个/只; imDC组: 受体术前1 d经阴茎背静脉注射受体来源的imDC 1×106个/ 只。模型建立后10 d各组随机处死5只,取移植肝脏组织行HE染色和免疫组化(FasL/Fas)染色,观察肝脏组织形态结构和排斥反应,根据Banff评分系统判断排斥反应程度; Western blot分析检测各组Foxp3编码的Scurfin蛋白的表达。另留5只大鼠观察术后存活时间; 收集血标本,全自动生化分析仪测定ALT、TBIL; 双抗体夹心ELISA法检测血清IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10水平。结果 CsA组和imDC组术后大鼠中位生存时间明显长于对照组和mDC组,差异有统计学意义( P < 0.05)。移植术后各组大鼠血清生化检查: 对照组和mDC组ALT及TBIL明显高于CsA组和imDC组( P < 0.05); 且IL-2和IFN-γ也明显高于CsA组和imDC组( P < 0.01),但IL-4和IL-10明显低于CsA组和imDC组( P < 0.01)。移植肝脏形态学检测: 对照组和mDC组与CsA组和 imDC 组比较,排斥反应更严重( P < 0.05)。Western blot检测: imDC组Foxp3编码的Scurfin蛋白的表达明显高于其他3组( P < 0.05)。结论 imDC通过阻断间接识别能明显延长移植物存活时间。imDC可能通过以下机理诱导免疫低反应: 诱导T细胞凋亡; 选择性激活Th2细胞亚群,诱导Th1/Th2偏移; 诱导调节性T细胞产生。

    发表时间:2016-08-28 03:48 导出 下载 收藏 扫码
  • 激活型Akt1转染大鼠胰岛对移植物凋亡和再血管化的影响

    目的 探讨腺病毒介导激活型蛋白激酶B(Akt1)基因(Adv-CA-Akt1)转染大鼠胰岛对同种糖尿病大鼠胰岛移植物凋亡和再血管化的影响。方法 分离纯化Wistar大鼠胰岛,转染Adv-CA-Akt1。36只糖尿病Wistar大鼠完全随机均分为3组: Adv-CA-Akt1组(Adv-CA-Akt1转染的胰岛移植); Adv-LacZ组(Adv-LacZ转染的胰岛移植); 未转染组(单纯胰岛移植)。术后每日测血糖,隔日测血清胰岛素浓度,术后10 d行静脉糖耐量试验(IVGTT)观察胰岛功能; HE染色和胰岛素免疫组化检测胰岛功能,细胞凋亡原位检测胰岛凋亡,CD31免疫组化计数微血管密度(MVD)。结果 Adv-CA-Akt1组大鼠血糖术后2 d恢复正常,Adv-LacZ组和未转染组血糖虽下降但仍高于正常; Adv-CA-Akt1组术后各时相血清胰岛素水平明显高于其他2组( P < 0.05) 。IVGTT示Adv-CA-Akt1组血糖下降较快,60 min恢复至空腹水平; 另2组下降慢,60 min仍未恢复至空腹水平。术后3 d,Adv-CA-Akt1组肾被膜下存活胰岛细胞数量多,胰岛素免疫组化证明为有功能的胰岛。Adv-CA-Akt1组胰岛凋亡率比Adv-LacZ组和未转染组降低约25% ; 术后12 d,Adv-CA-Akt1组MVD比Adv-LacZ组及未转染组明显增高( P < 0.05)。结论 激活型Akt1转染大鼠胰岛能够抑制胰岛细胞凋亡,提高胰岛β细胞功能,促进移植物早期再血管化。

    发表时间:2016-08-28 03:48 导出 下载 收藏 扫码
  • CTLA4- Ig抗大鼠肝移植排斥反应及诱导免疫耐受的实验研究

    【摘要】目的 建立大鼠原位肝移植(ROLT)急性排斥反应模型,探讨细胞毒淋巴细胞抗原4免疫球蛋白(CTLA4Ig)抗排斥反应和诱导免疫耐受的作用。 方法 采用“二袖套管”法建立Wistar→SD大鼠配对组合的肝移植后排斥反应模型,并于术后第2天腹腔内一次性注射CTLA4Ig(75 μg/只大鼠),与未给药的相同组合的排斥反应模型鼠对照研究,观察移植术后7 d 2组动物的一般情况、肝功能变化、移植肝病理改变及血清TNFα水平的变化,同时观察CTLA4Ig组动物术后4个月时的上述情况,以了解CTLA4Ig抗排斥及诱导免疫耐受的作用。 结果 ①对照组动物于肝移植术后6~14 d内相继死亡; 移植肝出现明显的排斥反应的病理改变征象。 ②CTLA4Ig组动物于术后7 d及4个月均未见明显的排斥反应表现,移植肝无明显的排斥反应的病理改变征象,血清TNFα、ALT、AST、TBIL及DBIL水平均明显低于对照组(P<0.05),TP及Alb水平则明显高于对照组(P<0.05)。 结论 CTLA4Ig有抗排斥反应及诱导免疫耐受功能的作用; 血清TNFα水平作为观察ROLT后排斥反应的指标,可能有一定的参考价值。

    发表时间:2016-08-28 04:28 导出 下载 收藏 扫码
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