华西医学期刊出版社
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找到 关键词 包含"细胞,培养的" 7条结果
  • 川芎嗪对人脐静脉内皮细胞缺氧相关因子表达的影响

    目的 观察川芎嗪(TMP)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺氧相关因子表达的影响。方法 体外培养HUVECs,取2~5代细胞进行实验。将HUVECs分为对照组、氯化钴(CoCl2)缺氧组及50、100、200 mu;mol/L TMP药物处理组。对照组不作任何处理。CoCl2缺氧组利用150 mu;mol/L的CoCl2干预HUVECs 4 h;50、100、200 mu;mol/L TMP药物处理组在CoCl2干预HUVECs 4 h后,再加入不同浓度TMP继续培养8 h。分别提取各组细胞RNA和总蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脯氨酰羟化酶2(PHD2)、缺氧诱导因子-1alpha;(HIF-1alpha;)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白的表达。结果 实时RT-PCR检测结果 显示,与对照组比较,CoCl2缺氧组PHD2 mRNA表达下降(t=3.734),HIF-1alpha;和VEGF mRNA表达升高(t=4.589、3.926),差异均有统计学意义(P<0.05)。50、100、200 mu;mol/L TMP药物处理组分别与CoCl2缺氧组比较,PHD2 mRNA表达均升高(t=3.286、3.617、3.886),差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1alpha; mRNA表达均无明显变化(t=1.025、0.726、-1.386),差异无统计学意义(P>0.05);VEGF mRNA表达均有所下降,但50 mu;mol/L TMP药物处理组与之差异无统计学意义(t=1.696,P>0.05),100、200 mu;mol/L TMP药物处理组与之差异有统计学意义(t=2.974、3.492,P<0.05)。Western blot检测结果 显示,与对照组比较,CoCl2缺氧组PHD2蛋白表达下降,差异有统计学意义(t=3.122,P<0.05);HIF-1alpha;及VEGF蛋白表达均有不同程度升高,差异有统计学意义(t=3.778、3.257,P<0.05)。50、100、200 mu;mol/L TMP药物处理组分别与CoCl2缺氧组比较,PHD2 蛋白表达均升高(t=2.813、3.026、3.078),差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1alpha;、VEGF蛋白表达均有所下降,但50 mu;mol/L TMP药物处理组与之差异无统计学意义(t=2.056、1.986,P>0.05),100 mu;mol/L TMP药物处理组(t=3.058、2.976)及200 mu;mol/L TMP药物处理组(t=3.828、3.136)与之差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TMP能上调缺氧HUVECs中PHD2 mRNA和蛋白的表达,下调HIF-1alpha;蛋白、VEGF mRNA和蛋白的表达。

    发表时间:2016-09-02 05:22 导出 下载 收藏 扫码
  • 玻璃体液诱导视网膜色素上皮细胞间质转分化作用

    目的 观察人玻璃体液体外培养诱导人视网膜色素上皮(RPE)细胞间质转分化作用。 方法 将3~5代传代人RPE细胞分为普通培养组和玻璃体液培养组,分别应用普通培养液和25%玻璃体液进行培养。采用相差显微镜观察两组细胞形态变化,细胞爬片检测肌动蛋白细胞骨架的变化。分别用细胞划痕法、Transwell小室侵袭法及Ⅰ型胶原凝胶收缩实验检测细胞迁移、侵袭及收缩力的变化。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测alpha;-平滑肌肌动蛋白(alpha;-SMA)和Snail1 mRNA的表达。 结果 相差显微镜观察发现,普通培养组细胞保持扁平形态,细胞接触广泛;玻璃体液培养组细胞一端呈扇形,另一端呈锥形拖尾形或梭形,细胞生长呈彼此分离的方式。细胞爬片结果显示,普通培养组肌动蛋白骨架主要分布于RPE细胞周边部,形如细胞周边的条带状;玻璃体液培养组肌动蛋白纤维在细胞的一端重排,形成扇形扁平状伪足突起,而在细胞另一端形成锥形拖尾改变。玻璃体液培养组与普通培养组比较,RPE迁移及侵袭能力显著增强(t=14.190、22.630)、细胞收缩能力显著下降(t=6.221),差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,玻璃体液培养组与普通培养组比较,Snail1 mRNA表达显著上升(t=3.218,P=0.032),alpha;-SMA mRNA表达显著下降(t=3.990,P=0.016),差异均有统计学意义。 结论 玻璃体液培养可诱导RPE细胞间质转分化。这一作用通过增强RPE细胞迁移及侵袭能力,抑制RPE细胞收缩力;提高RPE细胞Snail1 mRNA表达,下调alpha;-SMA mRNA表达实现。

    发表时间:2016-09-02 05:21 导出 下载 收藏 扫码
  • α-硫辛酸对高压条件下培养大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

    目的 观察alpha;-硫辛酸对高压条件下培养大鼠视网膜神经节细胞(RGC)的保护作用。方法 将RGC分为正常对照组、阴性对照组、单纯加压组、加压联合不同浓度alpha;-硫辛酸干预组。正常对照组和单纯加压组不做任何处理;阴性对照组仅接受200 mu;mol/L alpha;-硫辛酸预处理;加压联合不同浓度的alpha;硫辛酸干预组分别用50、100、200 mu;mol/L等3种不同浓度的alpha;-硫辛酸对其进行干预。alpha;-硫辛酸预处理1 h后,单纯加压组和各干预组置于50 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)下培养24 h;正常对照组、阴性对照组置于常压下培养24 h。分别用噻唑蓝比色法检测各组细胞的活性;4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察各组细胞核形态改变;实时聚合酶链反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测并比较各组细胞中锰超氧化物歧化酶(MnSOD) mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 单纯加压组细胞活性为(65.6plusmn;3.4)%,50、100、200 mu;mol/L 3种浓度的alpha;-硫辛酸干预组细胞活性分别为(75.1plusmn;3.3)%、(81.8plusmn;2.9)%、(87.9plusmn;3.1)%,均较单纯加压组显著增高(t=5.108、10.007、12.513,P<0.05)。DAPI染色显示,加压后RGC-5细胞核可见空泡、染色质高度凝聚、边缘化等典型的凋亡特征,而alpha;-硫辛酸干预组仅有部分细胞核染色质表现出浓缩现象。Real-time PCR及Western blot检测结果显示,加压培养后细胞内MnSOD mRNA和蛋白相对表达量较正常对照组显著降低(t=22.045、26.979,P<0.01);与单纯加压组相比,alpha;-硫辛酸干预组细胞内MnSOD mRNA和蛋白相对表达量均显著增高,差异有统计学意义(t=9.171、12.267、23.567、7.723、12.009、28.198,P<0.05);不同浓度的alpha;-硫辛酸干预组之间,随alpha;-硫辛酸浓度增加,MnSOD mRNA和蛋白相对表达量呈升高趋势,且差异有统计学意义(F=134.273、194.597,P<0.01)。结论 应用alpha;-硫辛酸可以显著提高高压条件下大鼠RGC的细胞活性及细胞内MnSOD的表达水平,增强细胞抗氧化损伤能力。

    发表时间:2016-09-02 05:26 导出 下载 收藏 扫码
  • 微囊化人内皮抑素/293细胞生物学性状及其对人脐静脉内皮细胞增生的抑制作用

    目的 观察不同细胞密度的微囊化人内皮抑素/293(hES/293)细胞生物学性状及其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增生的抑制作用。方法 采用聚电解质络合法制作不同密度微囊化hES/293细胞,分为1×104个/ml组(A组)、1×106个/ml组(B组)、1×108个/ml组(C组);同时将微囊内不包裹hES/293细胞者设为对照组(D组);每组6个样本。培养后1、3、7、14、35 d,锥虫蓝染色计数微囊囊内细胞总数、活细胞数和存活率;噻唑蓝(MTT)比色法检测各组微囊化hES/293细胞的生长情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测微囊化hES/293细胞囊外内皮抑素(ES)蛋白释放量。取生长状态良好的HUVEC分别与A、B、C、D组微囊化hES/293细胞共同培养。于共同培养后24、72、120 h,MTT比色法检测微囊化hES/293细胞对HUVEC增生的抑制作用。结果 A、B、C组微囊囊内hES/293细胞总数和活细胞数均随时间延长而增多,囊内细胞存活率于培养后3 d最高。A、B、C组微囊化hES/293细胞生长速率比较,培养后1 d时组间差异无统计学意义(P>0.05);培养后3 d,A组较B、C组高,差异有统计学意义(P<0.05);培养后7、14、35 d,B组较A、C组高,差异有统计学意义(P<0.05)。A、B、C组微囊化hES/293细胞囊外ES蛋白释放量比较,培养后1、14 d时组间差异无统计学意义(P>0.05);培养后3 d,A组较B、C组高,差异有统计学意义(P<0.05);培养后7、35 d,B组较A组高,差异有统计学意义(P<0.05)。共同培养后24 h,A、B、C组对HUVEC均未表现出抑制作用(P>0.05);共同培养后72、120 h,A、B、C组均明显抑制HUVEC增生,差异有统计学意义(P<0.05)。结论细胞密度为1×106个/ml的微囊化hES/293细胞生长稳定、存活率较高,可持续稳定的释放ES蛋白。不同密度的微囊化hES/293细胞均可抑制HUVEC增生。

    发表时间:2016-09-02 05:37 导出 下载 收藏 扫码
  • 精氨酸酶抑制剂对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞的保护作用

    目的 观察精氨酸酶(Arg)抑制剂N羟基-正-L精氨酸(nor-NOHA)对体外高糖培养的恒河猴视网膜微血管内皮细胞(RF/6A细胞)的保护作用。 方法 体外培养RF/6A细胞,并将其分为正常对照组(A组)、高糖对照组(B组)、高糖+nor-NOHA处理组(C组)、高糖+二甲基亚砜(DMSO)对照组(D组)。A组细胞以5.5 mmol/L葡萄糖继续培养;B~D组以25.0 mmol/L葡萄糖继续培养,C、D组分别加入125 mg/L的nor-NOHA及1%DMSO。采用噻唑蓝比色法、Transwell小室法和体外成管实验分别检测各组RF/6A细胞增生、迁移和管腔形成能力。采用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组RF/6A细胞中ArgⅠ、内皮型一氧化氮(NO)合酶(eNOS)、诱导型NO合酶(iNOS)的mRNA相对表达量。采用酶链免疫吸附测定试验(ELISA)检测各组RF/6A细胞培养上清液中NO和白细胞介素(IL)-1b的分泌量。 结果 B组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较A组明显降低,差异有统计学意义(t=2.367、5.633、7.045,P<0.05);C组RF/6A细胞增生、凋亡及管腔形成能力较B组提高,差异有统计学意义(t=5.260、6.952、8.875,P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,与A组比较,B组RF/6A细胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相对表达量升高(t=6.836、3.342),C组RF/6A细胞中ArgⅠ、iNOS mRNA相对表达量降低(t=4.904、7.192),差异均有统计学意义(P<0.05);B组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量降低(t=4.165),C组RF/6A细胞中eNOS mRNA相对表达量升高(t=6.594),差异均有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与A组比较,B组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量减少(t=4.925),C组RF/6A细胞培养上清液中NO分泌量增多(t=5.368),差异均有统计学意义(P<0.05);B组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量增多(t=5.032),C组RF/6A细胞培养上清液中IL-1b分泌量减少(t=7.792),差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论 nor-NOHA对体外高糖培养的RF/6A细胞有保护作用,可提高其增生、迁移及管腔形成能力;其机制可能是通过平衡Arg/NOS的表达从而抑制氧化应激反应。

    发表时间:2017-05-15 12:38 导出 下载 收藏 扫码
  • 慢病毒载体介导色素上皮衍生因子基因转染人脐带间充质干细胞研究

    目的 构建携带色素上皮衍生因子(PEDF)基因的慢病毒(LV)载体并转染人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),初步探讨基因修饰PEDF-间充质干细胞的可行性。 方法 采用基因重组方法构建LV-PEDF载体,测定其LV滴度,以感染复数(MOI)值为10、30、50 的LV体外转染hUCMSCs,并据此分为相应MOI值实验组;以不含PEDF基因的相同MOI值的重组LV载体[LV-绿色荧光蛋白(GFP)]转染hUCMSCs,并据此分为 相应MOI值对照组。荧光显微镜观察两组细胞转染效率并计算转染率。采用细胞免疫荧光法、免疫细胞化学法、实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测50MOI实验组、50MOI对照组细胞中PEDF、血管内皮生长因子(VEGF) 表达水平。 结果 经酶切以及基因测序鉴定证明LV载体构建成功。转染96 h后,50MOI实验组细胞可见大量GFP表达,转染效率为72.1%。荧光显微镜观察发现,转染后96 h,50MOI实验组细胞胞浆PEDF、VEGF表达增强。光学显微镜观察发现,转染后96 h,50MOI实验组细胞胞浆PEDF表达较低,而VEGF表达较强。RT-PCR检测结果发现,50MOI实验组、50MOI对照组细胞中PEDF mRNA相对表达量分别为0.170±0.028、0.015±0.007;VEGF mRNA相对表达量分别为0.265±0.022、0.285±0.049。两组细胞中PEDF mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义(F=70.29,P<0.001);VEGF mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(F=9.57,P>0.05)。 结论 成功构建携带PEDF基因LV表达载体,并在hUCMSCs中过表达PEDF基因。

    发表时间:2017-11-20 02:25 导出 下载 收藏 扫码
  • 阿托伐他汀对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞CXC趋化因子受体4表达及迁移能力的影响

    目的观察不同浓度阿托伐他汀(ATV)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)中 CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达及迁移能力的影响。方法分离培养鉴定大鼠BMSC。将第4~6代细胞分为对照组和ATV处理0.1 nmol/L组、1.0 nmol/L组、10.0 nmol/L组、100.0 nmol/L组、1 000.0 nmol/L组。ATV处理12 h后,细胞免疫荧光法、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中CXCR4蛋白表达;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中CXCR4 mRNA表达;Transwell小室法检测细胞迁移能力。组间细胞中mRNA、蛋白表达和细胞迁移能力比较行独立样本t检验。结果细胞免疫荧光法检测结果显示,1.0 nmol/L组、10.0 nmol/L组细胞中CXCR4蛋白表达量较对照组、0.1 nmol/L组、100.0 nmol/L组、1 000.0 nmol/L组明显增高;RT-PCR、Western blot检测结果显示,10.0 nmol/L组细胞中CXCR4 mARNA、蛋白表达均较1.0 nmol/L组和对照组明显增高,差异有统计学意义(FmARNA=20.36,P=0.005;F蛋白=33.17,P=0.009);Transwell小室法检测结果显示,10.0 nmol/L组细胞迁移能力较1.0 nmol/L和对照组明显提高,差异有统计学意义(F=43.77,P=0.000)。结论较低浓度ATV可呈剂量依赖性促进体外培养的BMSC中CXCR4表达并提高其迁移能力。

    发表时间:2018-11-16 03:02 导出 下载 收藏 扫码
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