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找到 关键词 包含"间质干细胞" 30条结果
  • 脐血间质干细胞经肌源性诱导后细胞内游离钙的变化

    目的 研究3 种不同的肌源性诱导方法对脐血间质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)进行诱导后细胞内Ca2+调控系统分化的影响。 方法 2007年1月至2010年4月上海交通大学医学院附属新华医院采用 5氮杂胞嘧啶核苷(5azacytidine,5aza)、心肌裂解液和心肌诱导液分别诱导犬脐血MSCs。采用激光共聚焦显微镜检测 5aza、 心肌裂解液和心肌诱导液诱导的细胞、 心肌细胞和MSCs内Ca2+荧光探针Fluo3/ AM 结合的Ca2+,每份细胞选取2~5个视野,每一种细胞观察记录30个视野,取每1 min摄得的10张图象的平均荧光强度值,以光密度值(OD)反映细胞内游离Ca2+浓度;并连续监测细胞内游离Ca2+浓度的变化。 结果 经3种方法诱导后细胞内游离Ca2+浓度均高于心肌细胞内游离Ca2+浓度(F=59.400, P=0.000)。5-aza、心肌裂解液和心肌诱导液诱导的细胞内游离Ca2+浓度差异有统计学意义(F=18.988,P=0.000)。5-aza诱导的细胞内游离Ca2+浓度与心肌裂解液诱导的细胞比较差异无统计学意义(OD 1 076.88±44.65 vs. 1 040.90±37.48, P=0.186),但其浓度高于心肌诱导液诱导的细胞(OD 1 076.88±44.65 vs. 973.91±46.49, P=0.001),心肌裂解液诱导的细胞内游离Ca2+浓度高于心肌诱导液诱导的细胞(OD 1 040.90±37.48 vs. 973.91±46.49,P=0.001)。3种诱导方法诱导后的细胞内游离Ca2+呈自发性波动,与心肌细胞相似,但其频率和幅度有明显差异。5-aza、心肌裂解液诱导后的MSCs在KCl刺激下能使细胞内Ca2+瞬时释放,心肌诱导液诱导后的MSCs对KCl也有反应,但不能诱发Ca2+释放,而是使Ca2+释放时间延长。 结论 5-aza诱导、心肌裂解液和心肌诱导液诱导对MSCs的Ca2+调控系统有分化作用,3种方法的效果不同,其产生差异的原因和效果的优劣需进一步实验阐明。

    发表时间:2016-08-30 05:56 导出 下载 收藏 扫码
  • 脐血干细胞肌源性诱导后移植细胞间连接的研究

    摘要: 目的 研究犬脐血间质干细胞(MSCs)肌源性诱导后移植,移植细胞是否与宿主细胞形成功能性整合, 检测细胞间连接的形成。方法 通过分离、纯化、培养脐血MSCs,Laz-Z转染标记,5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)肌源性诱导,将36只杂种犬随机分为两组,建立犬心肌梗死模型。细胞移植组:经冠状动脉和局部注射,将约107个MSCs移植到犬急性心肌梗死模型;对照组:用同样的方法注射等量的生理盐水。两组分别于2、4和8周时取组织切片,用免疫组织化学法检测细胞间连接。 结果 脐血MSCs呈梭形或纺锤形,克隆样生长;5-aza诱导后肌源性分化,可表达α-actin(+),desmin(+),connexin43(+)。移植的细胞可存活8周以上,移植细胞、移植细胞和宿主心肌连接处有cadherin和connexin43的阳性表达;而对照组仅有cadherin和 connexin43的表达。 结论 脐血MSCs可在体外诱导为心肌样细胞,移植后能与宿主心肌形成有效连接,从而具有通讯联系。

    发表时间:2016-08-30 06:08 导出 下载 收藏 扫码
  • 脐血间质干细胞移植于梗死心肌后对心肌基本结构的保护作用

    目的 探讨经诱导分化为肌源性干细胞的脐血间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)移植于梗死心肌后对梗死心肌组织结构改变的影响。方法 将36只成年杂种犬随机分为脐血MSC移植组(移植组)和对照组,每组各18只。移植组:用5一氮杂胞嘧啶核苷(5-azacytidine,5-aza)诱导分化后的脐血MSC,经结扎的犬冠状动脉左前降支远端灌注移植入梗死区;对照组:给予等量含0.02%的4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)的IMDM培养液注射。于移植2周、4周和8周时用Nagar—Olsen染色法观察心肌组织基本结构改变,用免疫细胞化学染色法观察残存心肌细胞结蛋白(desmin)分布变化。结果 Nagar—Olsen染色结果显示:移植组梗死心肌组织内弹力纤维、胶原纤维排列整齐、规律;对照组排列较紊乱、无规律,部分发生融合。移植组梗死区域心肌细胞结蛋白表达明显高于对照组(P〈0.01),而两组正常区域心肌细胞结蛋白表达差别无统计学意义(P〉0.05)。结论 脐血MSC在体外经5-aza诱导分化为肌源性干细胞并移植入梗死心肌后,对梗死心肌组织结构具有保护作用。

    发表时间:2016-08-30 06:18 导出 下载 收藏 扫码
  • 骨髓间质干细胞移植梗死心肌后细胞因子分泌及对血管新生的影响

    目的 研究骨髓间质干细胞 (MSCs)移植梗死心肌后细胞因子的分泌及其对血管新生的作用。 方法 贵州香猪 2 4只 ,按照计算器随机数法随机分为对照组、实验组。抽取骨髓液 3ml,按照 Wakitani的方法培养出骨髓间质干细胞 ,经 5 -氮胞苷 (5 - aza)诱导后 ,5 -溴脱氧尿苷 (Brd U)标记备用。开胸结扎左冠状动脉前降支 ,自体骨髓间质干细胞分别经局部注射和结扎的左冠状动脉前降支远端灌注移植入自体急性心肌梗死区域 ,对照组以 DMEM作对照。术后 3周、6周取标本 ,免疫组织化学法、计算机图象分析检测组织血管内皮生长因子 (VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和 因子表达。 结果 实验组梗死区 3周、6周 b FGF、VEGF灰度值明显高于对照组 (Plt;0 .0 1) ,微血管计数明显增多 (Plt;0 .0 1)。 结论 自体骨髓间质干细胞移植梗死心肌后能分泌 VEGF、b FGF,诱导血管新生。

    发表时间:2016-08-30 06:27 导出 下载 收藏 扫码
  • 骨髓间质干细胞移植对香猪急性心肌梗死后心肌结构和心功能的影响

    目的 移植自体骨髓间质干细胞 ( BMSCs)到香猪急性心肌梗死区内 ,研究移植 BMSCs对心肌结构和心功能的影响。 方法 将 2 4只贵州香猪采用计算器随机法分为实验组 ( n=12 )和对照组 ( n=12 ) ,抽取香猪自体骨髓 ,经体外分离出 BMSCs并培养和经 5 -氮胞苷 ( 5 - azacytidine)转化 ,利用结扎左前降支 ( L AD)的方法建立急性心肌梗死动物模型 ,经 L AD和梗死区多点注射的方法将实验组香猪注射 BMSCs(细胞总数 2× 10 6 个 ) ,对照组注射等量的细胞培养液。 3周和 6周后 ,用超声心动图 ( UCG)观察两组移植后心肌结构和心功能改变的情况。 结果 实验组左心室射血分数、左心室短轴缩短率和室壁增厚率明显高于对照组 ;左心室室壁、室间隔厚度和心室腔的大小在两组之间也存在明显差别 ,实验组室壁和室间隔厚度明显大于对照组 ,而心室腔小于对照组。 结论  BMSCs梗死区心肌移植后可减轻心室重构的进程 ,减轻心肌的变薄程度 ,使心室腔未明显扩大。 BMSCs移植还可增加心肌的收缩力 ,改善心功能。

    发表时间:2016-08-30 06:27 导出 下载 收藏 扫码
  • 人骨髓间质干细胞库的初步建立

    目的 探讨建立生物学性状稳定的人骨髓间质干细胞(human marrow mesenchymal stem cells, hMSCs)库的可行性, 为组织工程种子细胞的来源作初步探索。方法 对分离得到的hMSCs采用液氮低温冻存,并在一定时间复苏培养,以流式细胞仪检测其表面抗原, 在诱导培养基中对其行成骨和成软骨诱导培养,光镜、电镜观察细胞的形态,采用组织化学、免疫组织化学及分子生物学的方法检测成骨和成软骨诱导的特异标志物:碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原及骨钙素,研究其生物学性状。结果 从骨髓中分离得到了纯度达96%以上的hMSCs,复苏后的hMSCs形态和表面抗原保持不变,可继续扩增10代以上,倍增时间40 h。复苏后第2、6、10代hMSCs均保持较强的向软骨细胞、成骨细胞的分化能力。结论 初步建立了hMSCs库,可为骨及软骨组织工程提供较好的种子细胞。

    发表时间:2016-09-01 09:29 导出 下载 收藏 扫码
  • 人骨髓间质干细胞的优化培养

    目的 探索人骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的优化培养条件。方法 应用不同条件,研究原代培养方法、接种密度、首次换液时间、培养基、血清浓度及种类对细胞生长的影响,并以选定的条件培养、扩增MSCs,扩增后向成骨细胞和软骨细胞诱导。结果 在其它条件不变的前提下,密度梯度分离法优于全骨髓法,2.5×105/cm2是人MSCs原代培养的适宜接种密度,原代第5天首次换液为最佳换液时间,DMEM培养基优于α-MEM培养基,血清C为适宜的血清,10%为适宜的血清浓度。所选条件培养的MSCs可在体外扩增15代以上,形态保持不变,并具有良好的分化潜能。结论 建立了人MSCs的体外优化培养条件,为其在组织工程方面的应用作出了新的探索。

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  • 骨形成蛋白22 基因转染人骨髓间质干细胞诱导异位成骨的实验研究

    目的 评价腺病毒介导的人骨形成蛋白 - 2基因 (Adv- h BMP- 2 )转染人骨髓间质干细胞 (MSCs)的诱导成骨能力。方法 从人骨髓中分离培养获取 MSCs,分为三组 :1Adv- h BMP- 2转染细胞组 ;2 Adv- βgal转染细胞组 ;3未转染细胞组。分别于体外行 Western immunoblot试验、碱性磷酸酶 (AL P)和 Von Kossa染色、AL P定量测定 ,以及裸鼠肌内诱导成骨试验。共 9只裸鼠 ,双侧股后肌群内注射 ,每组 6侧。结果  Adv- h BMP- 2组 MSCs可分泌 BMP- 2蛋白 ;转染后第 9天 AL P染色多数细胞为阳性 ,其它两组 AL P染色阳性细胞少见 ;AL P活性第 3天开始升高 ,12天达高峰为 14 .76单位 ,与其它两组比较有统计学意义 (Plt;0 .0 5 ) ;于第 2 1天后出现钙结节 ,而其它两组未见。裸鼠肌内注射后 4周 Adv- h BMP- 2组 X线片均有异位成骨 ,Adv- βgal转染细胞组未见明显成骨 ,未转染细胞组仅有少量骨形成。组织学检查发现 :Adv- h BMP- 2组也可见典型的板层骨和骨髓腔腔形成,Adv-βga组主要为纤维组织,未转染组也可见散在骨小梁形成功之路。 结论 Adv-hMBP-2基因转染可诱导人骨髓间质干细胞成骨。

    发表时间:2016-09-01 09:35 导出 下载 收藏 扫码
  • 骨髓间质干细胞复合生物陶瓷构建组织工程化人工软骨

    目的 探索以多孔β-磷酸三钙 (β- TCP)生物陶瓷材料为支架 ,经体外诱导的骨髓间质干细胞 (MSCs)为种子细胞 ,构建组织工程化软骨修复羊关节软骨缺损的可行性。方法 将 2 8只中国美利奴绵羊分为三组。实验组 (n=12 ) :分离培养羊自体第 7代 MSCs,经转化生长因子 - β诱导后接种到预制的 β- TCP多孔生物陶瓷材料上 ,细胞 -材料复合体经体外孵育后 ,无菌条件下植入预制的羊单侧肱骨近端关节面缺损处 ;单纯材料组 (n=12 ) :采用单纯β- TCP材料修复羊关节软骨缺损 ;空白对照组 (n=4 ) :制备的羊关节软骨缺损区未做任何修复。术后 12周和 2 4周分别取材 ,进行组织学、组织化学和免疫组织化学分析。结果 实验组术后 12周羊关节软骨缺损处肉眼可见透明软骨样组织形成 ,组织学检查发现 ,材料降解明显 ,未降解吸收的材料孔洞内广泛分布着新生软骨组织 ,软骨细胞外基质丰富 , 型胶原染色阳性 ;术后 2 4周 ,支架材料几乎完全降解 ,缺损区被新生软骨组织所取代。单纯材料组术后 12周 ,缺损区边缘有新生软骨组织向支架材料内长入,缺损中央大部分区域仍未得到修复。结论 以β- TCP多孔生物陶瓷作为支架材料,以自体BMSCs作为种子细胞构建组织工程化软骨修复关节软骨缺损是可行的。

    发表时间:2016-09-01 09:35 导出 下载 收藏 扫码
  • 骨髓间质干细胞复合多孔磷酸钙陶瓷修复兔颅骨缺损的研究

    目的 探讨以骨髓间质干细胞 (MSCs)作为种子细胞、β-磷酸三钙 (β- TCP)多孔生物陶瓷作为支架材料构建组织工程化人工骨 ,修复兔实验性颅骨标准缺损的可行性。 方法 选择 5月龄新西兰大白兔 34只 ,制作颅骨标准缺损后分成 3组。A组 (n=2 0 ) :分离培养兔同胎异体 MSCs,体外扩增后接种到预制的 β- TCP多孔生物陶瓷材料上 ,细胞 -材料复合体经体外孵育后 ,无菌条件下植入颅骨缺损 ;B组 (n=10 ) :采用单纯β- TCP材料修复兔颅骨缺损 ;C组(n=4 ) :兔实验性颅骨标准缺损区未做骨修复。术后 6周和 12周分别处死动物、取材 ,进行缺损区大体、组织学、组织化学和免疫组织化学分析。 结果 颅骨缺损处 A组术后 6周表面肉眼可见骨样组织形成 ,组织学提示材料部分降解 ,未降解吸收的材料孔洞内广泛分布着新生骨组织 ,成骨细胞外基质丰富 , 型胶原染色阳性 ;术后 12周 ,支架材料几乎完全降解 ,缺损区被新生骨组织所取代。B组术后 6周 ,可见从缺损区边缘有新生骨组织向支架材料内长入 ,支架材料部分吸收 ;术后 12周 ,可见从缺损区边缘长入到支架材料内的新生骨组织逐渐增多,但材料的中心部位未发现新生骨形成.C组术后12周,仅见少量骨组织从缺损区边缘向缺损区内长入,缺损中央大部分区域未得到修复. 结论体外培养扩增的兔MSCs在不添加外源性生长因子的情况下,与β-TCP复合植入后可以在体内诱导、分化为成骨细胞,并能够对标准的颅骨缺损进行有效的修复,可进一步推广应用。

    发表时间:2016-09-01 09:35 导出 下载 收藏 扫码
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